恒温消解在蛋白质测定中的应用

恒温消解在蛋白质测定中的应用

 

苏敬武   丛伟红   车燕妮

（威海市卫生防疫站  威海  264200）

本文摘自《中国食品卫生杂志》2001年第13卷第4期

 

    凯氏定氮法测定蛋白质的含量，是zui常用的蛋白质测定方法，但样品的消解费事费时，一般一台电炉一天zui多消化两个样品。我们采用型恒温消解仪进行蛋白质消解，4~6小时可同时消化16个样品。

1  实验方法

1.1  仪器及试剂

1.1.1  仪器

    DTD-40型恒温消解仪（北京中卫食品卫生科技公司出品）；平底硬质玻璃消化管；定氮蒸馏装置。

1.1.2  试剂

    硫酸铜；硫酸钾；硫酸；过氧化氢；20g/L硼砂溶液；混合指示剂：2份1g/L甲基红乙醇溶液与5份2g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合；400g/LNaOH溶液；C（HCl）=0.02000mol/L的盐酸标准滴定溶液。

1.2  实验操作

1.2.1  样品消解

    称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗，置于恒温消解仪中，300℃左右，小心加热，一般2h内，管内容物可全部炭化，泡沫*停止。将温度降至240℃左右，分几次向管内共加10ml过氧化氢，提高温度至390℃左右，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热30min，放冷后，定容100ml，混匀备用。取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。

    本方法全部消化过程约需4-6h，一次zui多可消化16个样品。

同时使用普通电炉进行蛋白质消解，进行比较实验。

1.2.2  定氮测定

    按国家标准^[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白质的测定方法（4.3）微量定氮法进行操作。

2 结果及讨论

2.1 样品的用量：根据不同的蛋白质含量，取0.2g-2.0g样品，置消化管内进行消解，在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜，可加快消解速度。开始消解时，由于消解温度恒定，消解管整体受热均匀，一般泡沫不能溢出管外，较直接电炉消解容易控制。

2.2 消解温度：初始消解时温度不可过低，过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生，应及时把温度提高到390℃左右，以加快消解速度。

2.3 不同消解方法蛋白质测定结果的比较：对保健品、乳及乳制品等15份样品，用凯氏烧瓶和恒温消解仪消化样品，分别测定蛋白质含量，结果比较如下：

表1  两种消解方法蛋白质测定结果比较（%）

样品号	普通电炉消解法	恒温消解仪法
1	16.3	17.0
2	30.8	33.8
3	23.0	22.2
4	3.25	3.33
5	3.38	3.59
6	1.44	1.27
7	0.510	0.555
8	0.490	0.477
9	0.842	0.891
10	2.95	3.01
11	0.576	0.627
12	0.574	0.579
13	0.572	0.630
14	0.319	0.327
15	0.319	0.337

    T=1.033; T_[14,0.05）=2.145，P>0.05

    两种方法消化样品，蛋白质含量测得结果经统计学处理表明无显著差异。

参     考     文     献

1  GB/T 5009-1996  食品卫生检验方法（理化部分）