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恒温消解在蛋白质测定中的应用

浏览次数:7364发布日期:2009-07-16

恒温消解在蛋白质测定中的应用

 

苏敬武   丛伟红   车燕妮

(威海市卫生防疫站  威海  264200)

本文摘自《中国食品卫生杂志》2001年第13卷第4期

 

    凯氏定氮法测定蛋白质的含量,是zui常用的蛋白质测定方法,但样品的消解费事费时,一般一台电炉一天zui多消化两个样品。我们采用型恒温消解仪进行蛋白质消解,4~6小时可同时消化16个样品。

1  实验方法

1.1  仪器及试剂

1.1.1  仪器

    DTD-40型恒温消解仪(北京中卫食品卫生科技公司出品);平底硬质玻璃消化管;定氮蒸馏装置。

1.1.2  试剂

    硫酸铜;硫酸钾;硫酸;过氧化氢;20g/L硼砂溶液;混合指示剂:2份1g/L甲基红乙醇溶液与5份2g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合;400g/LNaOH溶液;C(HCl)=0.02000mol/L的盐酸标准滴定溶液。

1.2  实验操作

1.2.1  样品消解

    称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中,加0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于管口放一小漏斗,置于恒温消解仪中,300℃左右,小心加热,一般2h内,管内容物可全部炭化,泡沫完全停止。将温度降至240℃左右,分几次向管内共加10ml过氧化氢,提高温度至390℃左右,继续消化,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热30min,放冷后,定容100ml,混匀备用。取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。

    本方法全部消化过程约需4-6h,一次zui多可消化16个样品。

同时使用普通电炉进行蛋白质消解,进行比较实验。

1.2.2  定氮测定

    按国家标准[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白质的测定方法(4.3)微量定氮法进行操作。

2 结果及讨论

2.1 样品的用量:根据不同的蛋白质含量,取0.2g-2.0g样品,置消化管内进行消解,在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜,可加快消解速度。开始消解时,由于消解温度恒定,消解管整体受热均匀,一般泡沫不能溢出管外,较直接电炉消解容易控制。

2.2 消解温度:初始消解时温度不可过低,过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生,应及时把温度提高到390℃左右,以加快消解速度。

2.3 不同消解方法蛋白质测定结果的比较:对保健品、乳及乳制品等15份样品,用凯氏烧瓶和恒温消解仪消化样品,分别测定蛋白质含量,结果比较如下:

1  两种消解方法蛋白质测定结果比较(%)

      样品号

 普通电炉消解法

  恒温消解仪法

        1

      16.3

     17.0

        2

      30.8

     33.8

        3

      23.0

     22.2

        4

      3.25

     3.33

        5

      3.38

     3.59

        6

      1.44

     1.27

        7

      0.510

     0.555

        8

      0.490

     0.477

        9

      0.842

     0.891

        10

      2.95

     3.01

        11

      0.576

     0.627

        12

      0.574

     0.579

        13

      0.572

     0.630

        14

      0.319

     0.327

        15

      0.319

     0.337

    T=1.033; T[14,0.05)=2.145,P>0.05

    两种方法消化样品,蛋白质含量测得结果经统计学处理表明无显著差异。

              

1  GB/T 5009-1996  食品卫生检验方法(理化部分)

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